冷冻研磨仪研磨酵母菌的实验方法

实验目的

对大量和小量酵母菌分别进行研磨，进而提取其核酸或蛋白。

实验原理

通过研磨珠的撞击，充分破碎酵母菌细胞壁，使其内容物流出，进而提取目标成分。

实验材料和器具

样品：酵母菌

仪器：全自动样品冷冻研磨仪（上海净信，Tissuelyser-24）

耗材：离心管，不锈钢研磨珠（上海净信，中号研磨珠）

实验步骤

方法1  大量酵母菌的研磨方法

1.1 预处理研磨罐和研磨珠，然后放入液氮中冷却待用。

1.2 把酵母菌样本一颗一颗滴到干净的液氮中，使样本单个个体呈黄豆粒大小；

1.3 用镊子把这一颗颗如黄豆大小的酵母菌团夹到一个干净的烧杯或者其他容器内；

1.4 把1.3中样本一起倒入冷冻待用的研磨罐中，加入一颗中号珠子，不用太大也可；

1.5 把装好样本的研磨罐装入净信全自动样品研磨机上，设置频率11单位频振，20s，分5-6次研磨，每次间隔都把研磨罐放入液氮中冷却；

1.6 根据实验需求进行后续实验。

方法2  少量酵母菌的研磨方法

2.1 直接把样本加入装有半管玻璃细珠的离心管中；

2.2 把装好样本的离心管放入净信全自动样本研磨机上，频率13单位频振下研磨30s，休息10s，再在频率13单位频振下研磨30s，切勿连续研磨60s，否则导致升温将影响提取效果；

2.3 把研磨好的样本直接加入提取液，继续后续实验。

实验注意事项

1.少量酵母菌研磨好后，实验室需要检验离心管中酵母是否研磨达到要求，可以采用重叠离心管离心方法：具体步骤为，取一管研磨好装有酵母的离心管，在底部用针或者其他尖锐东西扎一小孔，再在该离心管底部套一新离心管，一起离心。后将新离心管中得到的酵母液进行镜检，若镜检无完整酵母细胞，则研磨效果达到要求。

2.如果上述步骤检测效果不理想，可以在第一步装样本前，先把酵母样本放入离心机，稍微离心，去除上浮液，再继续实验。